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HPLC-ELSD檢測方法測定黃芪注射液中黃芪甲苷的含量

黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）

Bge.Var.mongholicus（Bge.）Hsiao或膜莢黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.的幹燥根。春秋兩季采挖，除去須根及根頭，曬幹。

由於來源、產地、處理方式的不同，會導致黃芪的質量*不同，從而直接影響其藥用價值，因此必須建立一套完整的質量控製方法。

一、實驗過程

1.1 儀器

ELSD MODEL 200  SofTA Coporation

  液相係統：泵

  工作站：色譜采集係統

1.2 試劑

乙腈：色譜純

水  ：純淨水

甲醇：色譜純

黃芪甲苷對照品；黃芪注射液；黃芪陰性試劑

1.3 色譜係統及ELSD參數

  色譜柱：C18   5μ  250×4.6mm

流動相：乙腈：水（32：68）

流速：1.00 mL/min

ELSD參數： DF=60℃；SC=30℃

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下圖為在上述色譜條件下測定的黃芪對照品與黃芪注射液ELSD色譜圖：

1.4 曲線方程及線性關係

取對照品溶液配製成0.1、0.3、0.5、0.7、1mg/mL的溶液，以濃度對數值為橫坐標，以峰麵積對數值為縱坐標作回歸，方程為：y=1.48528x+2.26890，r²=0.9997，進樣量為20μL（滿環進樣），濃度在0.1-1mg/mL呈良好的線性關係。

1.5 係統適應性實驗

取供試品溶液2.0mL，按上述色譜條件，滿環進樣20μL，黃芪甲苷的保留時間為9.5min左右，理論塔板數不低於10000，托尾因子為1.06左右，分離度不小於5.0。

1.6樣品的含量測定

分別取黃芪注射液三批，按上述色譜條件，滿環進樣20μL。測定結果見表1。

表1樣品中黃芪甲苷的含量測定

二、討論

ELSD主要用於沒有紫外吸收或為紫外末端弱吸收的樣品，或流動相有紫外吸收幹擾或梯度洗脫時基線漂移影響測定;用ELSD檢測,流動相在漂移管便氣化蒸發,不影響樣品檢測。

黃芪甲苷是黃芪為原料的中藥製劑的主要質量控製指標。其含量測定方法有薄層色譜、HPLC—紫外放，采用ELSD作為檢測器—HPLC法也已見報道，但都存在樣品前處理複雜、色譜幹擾多且幹擾成分大等缺點。

由於ELSD本身的響應特性，黃芪甲苷濃度與其峰麵積值並不呈線性，而將濃度與峰麵積同時取以10為底的對數後可在一定範圍內（0.1～1mg/ml）得到理想的線性關係（r²=0.9997）。